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植物海藻糖-6-磷酸(T6P)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
BS-8050-A 植物海藻糖-6-磷酸(T6P)ELISA 試劑盒 96T
BS-8050-B 植物海藻糖-6-磷酸(T6P)ELISA 試劑盒 48T
一、實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)植物組織或細(xì)胞中的T6P水平。微孔板預(yù)包抗T6P抗體，樣本中T6P與固相抗體結(jié)合后，加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的二抗形成復(fù)合物。加入底物TMB顯色，TMB在HRP催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色，酸終止后顯黃色，顯色深度與樣本中T6P濃度呈正相關(guān)，于450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度計(jì)算濃度?。
二、試劑盒組成
組分 規(guī)格 保存條件
預(yù)包被微孔板 12孔×8條 2-8℃密封干燥
標(biāo)準(zhǔn)品 凍干粉 -20℃復(fù)溶后分裝
HRP標(biāo)記檢測(cè)抗體 液體 避光2-8℃
顯色底物(TMB) A液+B液 現(xiàn)用現(xiàn)配，避光
終止液 2M硫酸 室溫
濃縮洗滌液 液體 40℃水浴溶解結(jié)晶
樣本xishi液 液體 含穩(wěn)定劑
注?：不同品牌組分可能存在差異，詳見(jiàn)具體說(shuō)明書(shū)。
三、樣本處理
1. 樣本類(lèi)型
植物組織?：稱(chēng)取0.1g組織，加入1mL提取液冰浴勻漿，離心取上清。
細(xì)胞/細(xì)菌?：收集離心后棄上清，超聲破碎細(xì)胞提取上清。
2. 保存條件
短期?：2-8℃保存≤48小時(shí)。
長(zhǎng)期?：分裝后-20℃凍存，避免反復(fù)凍融。
3. 稀釋建議
常規(guī)樣本?：推薦稀釋5-20倍(如取20μL樣本+180μL稀釋液)。
高濃度樣本?：需預(yù)實(shí)驗(yàn)確定稀釋倍數(shù)，最高稀釋100000倍(三步稀釋法)。
四、操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品配制?
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加1mL稀釋液復(fù)溶，混勻后靜置10分鐘。
進(jìn)行系列稀釋(如8pmol/L→4pmol/L→…→0.5pmol/L)。
加樣?
標(biāo)準(zhǔn)孔：50μL/孔。
樣本孔：先加40μL稀釋液，再加10μL樣本(總稀釋5倍)。
空白孔：不加樣本及二抗。
孵育?
37℃孵育120分鐘，洗板3次(每次浸泡1分鐘)。
顯色與終止?
每孔加TMB顯色液100μL，37℃避光孵育15分鐘。
加終止液50μL終止反應(yīng)，30分鐘內(nèi)測(cè)OD值。
五、注意事項(xiàng)
樣本避免?：含疊氮鈉(NaN3)樣本(抑制HRP活性)?。
試劑平衡?：使用前室溫平衡20分鐘，濃縮洗滌液需40℃水浴溶解結(jié)晶。
質(zhì)量控制?：建議設(shè)置復(fù)孔，標(biāo)準(zhǔn)曲線R2應(yīng)≥0.95。
六、結(jié)果分析
標(biāo)準(zhǔn)曲線?：以O(shè)D值對(duì)濃度繪制四參數(shù)方程。
濃度計(jì)算?：樣本OD值代入曲線方程，再乘以稀釋倍數(shù)。
注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢(xún)技術(shù)老師。
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