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人谷胱甘肽過氧化物酶4(GPX4)ELISA檢測試劑盒技術(shù)說明書
BS-9843 人谷胱甘肽過氧化物酶4(GPX4)ELISA試劑盒
產(chǎn)品概述
本試劑盒采用雙抗體一步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)?，用于體外定量檢測人血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液及細(xì)胞培養(yǎng)上清等樣本中的谷胱甘肽過氧化物酶4(GPX4)濃度。GPX4是谷胱甘肽過氧化物酶家族的關(guān)鍵成員，通過催化還原型谷胱甘肽(GSH)清除脂質(zhì)過氧化物，在抑制鐵死亡、維持細(xì)胞膜完整性及抗氧化應(yīng)激中發(fā)揮核心作用?。
檢測原理
雙抗體夾心法?：包被抗體與樣本中GPX4結(jié)合，生物素標(biāo)記抗體形成復(fù)合物，辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的鏈霉親和素催化顯色反應(yīng)，顯色強(qiáng)度與樣本中GPX4濃度成正比?。
特異性?：可特異性識別GPX4，與類似物無交叉反應(yīng)，確保檢測準(zhǔn)確性?。
試劑盒組成
組分 規(guī)格/描述
預(yù)包被微孔板 96孔板，含抗人GPX4抗體
標(biāo)準(zhǔn)品 凍干粉，重組人GPX4蛋白，臨用前用稀釋液復(fù)溶
生物素標(biāo)記抗體 液體，HRP標(biāo)記抗人GPX4抗體
顯色底物(TMB) 液體，3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺溶液
終止液 2M硫酸溶液
洗滌緩沖液 20×濃縮液，含吐溫-20
樣本稀釋液 緩沖液，用于稀釋高濃度樣本
封板膜 透明，用于微孔板密封
樣本處理與保存
樣本類型?：血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等?。
處理方法?：
血清/血漿：室溫凝固后離心(3000 rpm，10分鐘)，取上清。
組織勻漿：用生理鹽水制備10%勻漿液，離心取上清。
細(xì)胞裂解液：裂解后離心(15000 rpm，10分鐘)，取上清。
保存條件?：短期(≤7天)2-8℃保存，長期(>7天)需分裝-20℃凍存，避免反復(fù)凍融?。
操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：用樣本稀釋液將標(biāo)準(zhǔn)品依次稀釋為1000 pg/mL、500 pg/mL、250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL、31.25 pg/mL、15.63 pg/mL，0 pg/mL為空白對照?。
加樣?：每孔加入100 μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。
洗滌?：棄去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)5次，拍干。
加生物素標(biāo)記抗體?：每孔加入100 μL生物素標(biāo)記抗體，37℃孵育60分鐘。
加顯色底物?：每孔加入90 μL TMB底物，37℃避光孵育15-30分鐘。
終止反應(yīng)?：每孔加入50 μL終止液，混勻后立即測定吸光度。
結(jié)果計(jì)算
儀器設(shè)置?：酶標(biāo)儀波長450 nm(參考波長630 nm)。
數(shù)據(jù)處理?：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(pg/mL)為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣本濃度通過曲線方程計(jì)算，乘以稀釋倍數(shù)?。
靈敏度?：7.69 pg/mL，檢測范圍15.62-1000 pg/mL?。
注意事項(xiàng)
交叉反應(yīng)?：不與GPX1、GPX2、GPX3等類似物發(fā)生交叉反應(yīng)?。
操作規(guī)范?：
洗滌需干凈，避免殘留液體影響結(jié)果。
顯色時間控制在15-30分鐘，避免過度顯色導(dǎo)致數(shù)據(jù)偏差。
樣本避免反復(fù)凍融，以防蛋白降解。
質(zhì)量控制?：建議每批次實(shí)驗(yàn)設(shè)置雙孔復(fù)測，CV值<10%為合格?。
儲存條件
未開封試劑盒：2-8℃避光保存，有效期6個月。
開封后：標(biāo)準(zhǔn)品、抗體、底物等組分按說明書要求分裝保存，避免反復(fù)凍融?。
本說明書僅用于科研用途，不適用于臨床診斷。操作前請仔細(xì)閱讀完整說明書，并遵守實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范。
注：供科研使用，以上資料供參考。
人谷胱甘肽過氧化物酶4(GPX4)ELISA試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。
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