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大鼠表皮生長(zhǎng)因子(EGF)ELISA檢測(cè)試劑盒技術(shù)說(shuō)明書
BS-2926大鼠表皮生長(zhǎng)因子(EGF)ELISA試劑盒
一、產(chǎn)品概述
本試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，專用于體外定量檢測(cè)大鼠血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中表皮生長(zhǎng)因子(EGF)的含量。試劑盒僅供科研使用，不可用于臨床診斷。
二、檢測(cè)原理
雙抗體夾心法：
預(yù)包被抗大鼠EGF捕獲抗體的微孔板與樣本中EGF結(jié)合。
加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體，形成“抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物。
經(jīng)洗滌后，加入TMB顯色底物，在HRP酶催化下顯藍(lán)色，酸終止后變黃色。
顏色深淺與樣本中EGF濃度呈正相關(guān)，通過(guò)450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度(OD值)，計(jì)算濃度。
三、試劑盒組成
組分96孔配置48孔配置保存條件
預(yù)包被酶標(biāo)板1塊(96孔)1塊(48孔)2-8℃
標(biāo)準(zhǔn)品0.3ml×6管0.3ml×6管2-8℃f
生物素化檢測(cè)抗體120μL60μL2-8℃
顯色液A/B各6mL各3mL避光，2-8℃
終止液6mL3mL2-8℃
20×濃縮洗滌液60mL30mL室溫
封板膜4張2張室溫
四、樣本處理與保存
血清：
室溫凝固10-20分鐘，2000-3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，取上清。
避免溶血，2-8℃保存≤48小時(shí)，長(zhǎng)期需凍存(-20℃或-80℃)，避免反復(fù)凍融。
血漿：
使用EDTA/肝素抗凝，離心后取上清，處理方法同血清。
組織勻漿：
生理鹽水搗碎，離心取上清。
細(xì)胞上清：
離心去除顆粒，取上清液。
五、操作步驟
試劑準(zhǔn)備：
洗滌液：用蒸餾水1:20稀釋濃縮液。
標(biāo)準(zhǔn)品：按說(shuō)明書梯度稀釋(如80-2.5 U/L)。
加樣：
每孔加入50μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本，37℃溫育30分鐘。
洗滌：
每孔加滿洗滌液，浸泡30秒后甩干，重復(fù)5次。
顯色與終止：
加入HRP標(biāo)記抗體，37℃溫育30分鐘。
洗滌后，每孔加TMB顯色液避光反應(yīng)15分鐘，加終止液終止。
檢測(cè)：
450nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。
六、注意事項(xiàng)
試劑平衡：冷藏試劑需室溫平衡15-30分鐘后再使用。
加樣精度：使用校準(zhǔn)的移液器，避免交叉污染。
顯色控制：TMB顯色后及時(shí)終止，避免過(guò)度反應(yīng)。
數(shù)據(jù)有效性：每次實(shí)驗(yàn)需同步做標(biāo)準(zhǔn)曲線，建議設(shè)復(fù)孔。
七、性能參數(shù)
檢測(cè)范圍：31.2-2000 pg/mL(具體以說(shuō)明書為準(zhǔn))。
靈敏度：≤15.6 pg/mL。
有效期：6個(gè)月(2-8℃避光保存)。
八、自備器材
酶標(biāo)儀(450nm)、恒溫箱(37℃)、精密移液器(0.5-1000μL)。
注：本說(shuō)明書基于ELISA通用技術(shù)整理，具體操作請(qǐng)以實(shí)際試劑盒說(shuō)明書為準(zhǔn)。 (AI生成)
注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢技術(shù)老師。 Elisa試劑盒
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