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小鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA檢測(cè)試劑盒技術(shù)說(shuō)明書(shū)
發(fā)布時(shí)間:2025/10/24瀏覽:65次
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  小鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA檢測(cè)試劑盒技術(shù)說(shuō)明書(shū)

  BS-9437 小鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA試劑盒

  一、產(chǎn)品概述

  本試劑盒采用雙抗體夾心法原理,專用于定量檢測(cè)小鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞培養(yǎng)上清液中脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)的濃度?。LBP作為急性期蛋白,在炎癥反應(yīng)中具有雙重調(diào)控作用,其檢測(cè)對(duì)研究免疫防御機(jī)制及病理過(guò)程具有重要意義?。

  二、實(shí)驗(yàn)原理

  捕獲抗體包被?:抗小鼠LBP單抗體預(yù)包被于微孔板形成固相載體?。

  抗原-抗體復(fù)合物形成?:樣本中LBP與捕獲抗體結(jié)合,加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體形成"三明治"結(jié)構(gòu)?。

  信號(hào)放大?:加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素,與生物素結(jié)合實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大?。

  顯色檢測(cè)?:TMB底物顯色后,通過(guò)450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度值,濃度與OD值呈正相關(guān)?。

  三、試劑盒組分

  | 組分 | 規(guī)格(96T) | 保存條件 |

  | 預(yù)包被酶標(biāo)板 | 8×12條 | 2-8℃ |

  | 標(biāo)準(zhǔn)品 | 6濃度梯度 | -20℃ |

  | 生物素標(biāo)記抗體 | 120μL | -20℃ |

  | 酶標(biāo)復(fù)合物 | 12mL | 2-8℃ |

  | TMB顯色液 | A/B液各6mL | 2-8℃避光 |

  | 終止液 | 12mL | 室溫 |

  | 濃縮洗滌液 | 60mL | 室溫 |

  四、樣本處理

  血清/血漿?:

  血清:室溫靜置30min,2000×g離心15min,避免溶血?。

  血漿:EDTA抗凝,3000×g離心20min,去除血小板。

  組織樣本?:

  稱取100mg組織,加入1mL PBS勻漿,反復(fù)凍融3次裂解細(xì)胞?。

  12000×g離心10min取上清。

  細(xì)胞上清?:

  離心去除細(xì)胞碎片,上清液直接檢測(cè)或凍存?。

  保存條件?:

  短期:2-8℃(≤48h)

  長(zhǎng)期:-20℃(≤1月)或-80℃(≤3月),避免反復(fù)凍融?。

  五、操作流程

  試劑準(zhǔn)備?:

  濃縮洗滌液按1:20稀釋(示例:1mL濃縮液+19mL蒸餾水)?。

  標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋:取6支EP管,依次加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液200μL,倍比稀釋?。

  加樣反應(yīng)?:

  每孔加入樣本/標(biāo)準(zhǔn)品50μL,空白孔不加。

  37℃孵育60min,洗滌5次(每次靜置1min)。

  檢測(cè)步驟?:

  加入生物素標(biāo)記抗體100μL,37℃孵育30min。

  加入酶標(biāo)復(fù)合物100μL,37℃避光孵育20min。

  加入TMB底物100μL,避光顯色15min。

  加入終止液50μL終止反應(yīng)。

  讀數(shù)?:

  450nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值,參考630nm校正值?。

  六、結(jié)果分析

  標(biāo)準(zhǔn)曲線?:以標(biāo)準(zhǔn)品濃度對(duì)數(shù)為橫軸,OD值為縱軸繪制四參數(shù)擬合曲線?。

  樣本計(jì)算?:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程計(jì)算樣本濃度,乘以稀釋倍數(shù)?。

  檢測(cè)范圍?:0.156-10ng/mL(實(shí)際以說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn))?。

  靈敏度?:低檢測(cè)限≤0.078ng/mL?。

  七、注意事項(xiàng)

  樣本處理?:

  避免使用溶血、高血脂樣本?。

  組織樣本需去除污漬?。

  操作規(guī)范?:

  加樣時(shí)避免觸及孔壁,保持槍頭垂直?。

  洗滌需凈,殘留液體會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性。

  試劑保存?:

  TMB顯色液需避光保存,現(xiàn)配現(xiàn)用。

  酶標(biāo)板拆封后需密封防潮?。

  質(zhì)量控制?:

  建議設(shè)置復(fù)孔檢測(cè),CV值應(yīng)<15%?。

  標(biāo)準(zhǔn)曲線R2值需≥0.99?。

  八、常見(jiàn)問(wèn)題處理

  | 現(xiàn)象 | 可能原因 | 解決方案 |

  | 陰性對(duì)照OD值偏高 | 洗滌不凈/樣本污染 | 增加洗滌次數(shù)/更換樣本? |

  | 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性差 | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋錯(cuò)誤 | 重新配制標(biāo)準(zhǔn)品? |

  | 重復(fù)性差 | 加樣不均/孵育時(shí)間不一致 | 使用多道移液器/同步計(jì)時(shí)? |

  | 顯色過(guò)快/過(guò)慢 | 室溫波動(dòng)/底物失效 | 控制環(huán)境溫度/更換底物 |

  九、安全聲明

  本試劑含疊氮鈉(NaN?),避免接觸皮膚或吸入?。

  終止液含強(qiáng)酸,操作時(shí)佩戴防護(hù)手套?。

  注:以上僅供參考,不作為實(shí)際數(shù)據(jù),實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢技術(shù)老師。

  天津本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng),較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo),本生,您信任的合作伙伴!

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