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小鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書
BS-2260小鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)ELISA試劑盒
一、實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法，通過(guò)特異性抗體捕獲小鼠血清/血漿中的ALT，結(jié)合酶標(biāo)二抗顯色反應(yīng)，通過(guò)吸光度值定量檢測(cè)ALT活性。檢測(cè)范圍4.687-300U/L，靈敏度達(dá)1.17U/L 。
二、試劑組成
預(yù)包被微孔板：ALT抗體包被(96孔/板)
標(biāo)準(zhǔn)品：6瓶(0-100U/mL梯0度濃度)
酶標(biāo)二抗：凈(6mL)
底物液：TMB顯色液(A/B各6mL)
終止液：2Mliusuan(6mL)
濃縮洗滌液：20×Tween-20緩沖液(20mL)
三、操作步驟
1. 樣本準(zhǔn)備
采集小鼠全血至無(wú)內(nèi)毒素試管，離心(3000rpm,10min)分離血清/血漿。
避免溶血、脂血樣本，短期保存(2-8℃≤48h)，長(zhǎng)期需-80℃凍存(避免反復(fù)凍融)。
2. 檢測(cè)流程
步驟操作溫度/時(shí)間
1、標(biāo)準(zhǔn)品/樣本各100μL加至對(duì)應(yīng)孔室溫
2、加入酶標(biāo)二抗50μL，封板避光孵育37℃, 60min
3、洗滌液洗板3次(每次浸泡1min)-
4、加入底物液A/B各50μL37℃避光, 15min
5、加入終止液50μL，立即測(cè)450nm吸光度-
四、注意事項(xiàng)
試劑保存：未開封試劑2-8℃避光保存(有效期6個(gè)月)，開封后R1/R2需28天內(nèi)用完。
操作規(guī)范：
移液器吸頭不可混用，避免交叉污染。
洗滌需凈，避免殘留氣泡。
安全防護(hù)：處理樣本時(shí)需戴手套，廢棄物按生物危害物處理。
五、結(jié)果計(jì)算
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(濃度-OD值)，擬合線性方程。
樣本ALT活性(U/L)=(樣本OD值-空白OD值)/標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率。
六、常見(jiàn)問(wèn)題
高背景值：可能因洗滌不凈或底物曝光時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。
線性不佳：檢查標(biāo)準(zhǔn)品稀釋梯度或孵育溫度一致性。
注意：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢技術(shù)老師。
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