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　　做elisa實驗時需要注意哪些問題?

　　Elisa實驗中應該注意的問題,包括樣品稀釋、試劑盒平衡、樣品和試劑的混勻、加樣、溫育等問題。

　　1、樣品稀釋 ：

　　一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗確定,以試驗的靈敏度和特異性。酶聯(lián)免疫反應是一種敏感性很高的反應,如果血清不稀釋,不可避免會產(chǎn)生很強的非特異性反應,出現(xiàn)假陽性。

　　2、試劑盒平衡：

　　Elisa中所有試劑和板條均應在試驗平衡至室溫(約25℃),一般需在室溫放置20～30分鐘以上。平衡時間太短會造成試劑混勻不夠,樣品孵育時間相對縮短,ELISA反應不夠充分。冬季室溫低,可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。

　　3、樣品和試劑的混勻：

　　在稀釋、后的樣品必須充分混勻,所有試劑在加樣也須搖勻,以試驗的均一性。

　　4、加樣：

　　加樣是一項很重要的步驟。加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快,無法微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū),易導致非特異吸附。

　　5、溫育：

　　溫育是ELISA測定中影響測定成敗為關(guān)鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定,抗原抗體的結(jié)合反應在固相上進行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原結(jié)合,必須在一定的溫度條件下反應一定的時間。

　　6、洗板：

　　固相免疫測定技術(shù)是一種非均相免疫測定技術(shù),需以洗滌操作將特異結(jié)合于固相的抗原或抗體與反應溫育過程中吸附的非特異成份分離開來,以ELISA測定的特異性。

　　7、顯色：

　　顯色一定要控制時間,根據(jù)試劑盒說明操作即可。一般來說,顯色時間過短,結(jié)果偏低;顯色時間過長,空白增高或者非特異性顯色增加。

　　8、比色：

　　比色要注意波長的選擇。以TMB為底物和以OPD為底物的試劑盒均有使用,而者比色波長為450nm,后者為492nm,濾光片需根據(jù)要求隨時更換。因此,容易出現(xiàn)濾光片錯用的問題。

       注：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

　　elisa試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。