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瓊脂糖電泳常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案
以下是瓊脂糖電泳常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案的總結(jié)：
一、?條帶異常問(wèn)題?
條帶模糊/拖尾?
原因?：DNA降解、緩沖液陳舊或上樣過(guò)量
解決?：
使用新鮮緩沖液(TAE/TBE)，避免反復(fù)使用;
減少上樣量(每孔≤10μL)，避免超載;
檢查核酸酶污染，確保樣品純度。
條帶扭曲或"笑臉型"?
原因?：電場(chǎng)不均、梳子拔出不當(dāng)或膠體凝固不均
解決?：
預(yù)電泳5分鐘(低電壓)平衡電場(chǎng);
垂直緩慢拔梳子，避免孔變形。
Marker條帶不清晰?
原因?：膠濃度不合適或染料分布不均
解決?：
調(diào)整膠濃度(0.8%-2%按片段大小選擇);
改用泡染法(如GelRed后染色)。
二、?電泳過(guò)程問(wèn)題?
DNA遷移異常?
電壓過(guò)高?：>10V/cm易致條帶擴(kuò)散，建議5-8V/cm;
緩沖液錯(cuò)誤?：避免用自來(lái)水或高濃度母液，需1×TAE/TBE。
凝膠漂浮或緩沖液不流動(dòng)?
原因?：冷卻泵故障或密封不良
解決?：檢查設(shè)備密封性，調(diào)整蠕動(dòng)泵速度。
三、?其他關(guān)鍵問(wèn)題?
無(wú)條帶顯示?
原因?：電極接觸不良、DNA未染色或樣品降解
解決?：檢查電極連接，確認(rèn)染料活性。
背景熒光高?
原因?：膠體雜質(zhì)或紫外曝光過(guò)久
解決?：過(guò)濾瓊脂糖溶液，縮短紫外觀察時(shí)間。
拖尾現(xiàn)象?
原因?：DNA結(jié)合蛋白或鹽分污染
解決?：酚/氯仿純化樣品，乙醇沉淀去鹽。
四、?預(yù)防性建議?
制膠?：微波加熱瓊脂糖至透明，冷卻至60℃再加染料;
維護(hù)?：每次使用后蒸餾水沖洗電極，避免鹽結(jié)晶腐蝕;
保存?：Marker需-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
通過(guò)規(guī)范操作與針對(duì)性調(diào)整，可顯著提升電泳結(jié)果質(zhì)量。
BS-300 基礎(chǔ)性電泳儀電源
BS-600C 通用型電泳儀電源
BS-mini01 垂直電泳槽(雙板)
BS-mini04 垂直電泳槽(四板)
BS-ZY03 轉(zhuǎn)印電泳槽(WB雙板和鉑樂(lè)通用)
BS-ZY04 轉(zhuǎn)印電泳槽 (WB四板)
BS-sub02 瓊脂糖電泳槽
注：以上資料僅供參考，具體請(qǐng)咨詢技術(shù)老師。
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